蛋白層析柱是凝膠層析技術中的主體，我們研究所用的就是同興玻璃儀器，一般用玻璃管或有機玻璃管。根據樣品混合物中各組分在固定相和流動相中分配系數不同，從而分離的一種層析法。
蛋白層析柱的直徑大小不影響分離度，樣品用量大，可加大柱的直徑，一般制備用凝膠柱，直徑大于2厘米，但在加樣時應將樣品均勻分布于凝膠柱床面上。此外，直徑加大，洗脫液體體積增加，樣品稀釋度大。分離度取決于柱高，為分離不同組分，凝膠柱床要有適宜的高度，分離度與柱高的平方根相關，但由于軟凝膠柱過高擠壓變形阻塞，一般不超過1米。
層析柱是凝膠層析技術中的主體，一般用玻璃管或有機玻璃管。層析柱的直徑大小不影響分離度，樣品用量大，可加大柱的直徑，一般制備用凝膠柱，直徑大于2厘米，但在加樣時應將樣品均勻分布于凝膠柱床面上。此外，直徑加大，洗脫液體體積增加，樣品稀釋度大。
將一定量薄層層析硅膠裝入搪瓷盤置于烘箱中，于105。C活化2H后，取出放置室溫即可裝柱。柱子采用干法填充，填滿整個柱體，不留死體積，密封后用柱塞式計量溶劑泵按丙酮一石油醚（5：95）比例泵入溶劑，至溶劑流出止。
有效成分經TLC檢識全部流出后，用純丙酮5000ML再生，丙酮一石油醚（5：95）平衡后，可再次上樣，反復使用（使用次數隨原料不同而異，一般可連續使用2—6個月以上）。
