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      蛋白層析柱裝柱要均勻,流速不宜過快

      發布時間:2022-04-28   點擊次數:174次
        蛋白層析柱的直徑大小不影響分離度,樣品用量大,可加大柱的直徑,一般制備用凝膠柱,直徑大于2厘米,但在加樣時應將樣品均勻分布于凝膠柱床面上。此外,直徑加大,洗脫液體體積增加,樣品稀釋度大。
       
        分離度取決于柱高,為分離不同組分,凝膠柱床要有適宜的高度,分離度與柱高的平方根相關,但由于軟凝膠柱過高擠壓變形阻塞,一般不超過1米。分族分離時用短柱,一般凝膠柱長20-30厘米,柱高與直徑的比較5:1─10:1,凝膠床體積為樣品溶液體積的4-10倍。分級分離時柱高與直徑之線為20:1─100:1,常用凝膠柱有50×25厘米,10×25厘米。
       
        蛋白層析柱濾板下的死體積應盡可能的小,如果支掌濾板下的死體積大,被分離組分之間重新混合的可能性就大,其結果是影響洗脫峰形,出現拖尾出象,降低分辯力。在準確分離時,死體積不能超過總床體積的1/1000。
       
        始終保持柱內液面高于凝膠表面,否則水分蒸發,凝膠變干。也要防止液體流干,使凝膠混入大量氣泡,影響液體在柱內的流動。所用凝膠比較昂貴,需小心操作,實驗后回收,盡量避免浪費和損失。
       
        要很注意的是,各接頭不能漏氣,連接用的小乳膠管不要有破損,否則造成漏氣、漏液。裝柱要均勻,既不過松,也不過緊,要在要求的操作壓下裝柱,流速不宜過快,避免因此壓緊凝膠。
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